a.使用窄徑柱(3.0mm內徑)

  這部分內容將介紹如何減小柱外效應并提供如何在HPLC系統(tǒng)上使得窄徑柱達到最好的性能。一般來講3mm內徑的窄柱不需要改變HPLC系統(tǒng)。然而，如果使用2.1mm內徑的色譜柱則需要優(yōu)化HPLC系統(tǒng)以消除過多的系統(tǒng)譜帶擴展體積，過大的系統(tǒng)譜帶擴展體積會造成峰展寬，分離效果差，靈敏度降低。

b.系統(tǒng)譜帶擴展對2.1mm內徑的色譜柱的影響

  同樣的色譜柱，在譜帶擴展體積為70μL的系統(tǒng)上塔板數(shù)為10,000;而在譜帶擴展體積為100μL的系統(tǒng)上塔板數(shù)為8,000。

  提示:柱后分流器將引入額外的譜帶擴展LC系統(tǒng)特別是有柱后分流器的系統(tǒng)優(yōu)化對于靈敏度和分離度是至關重要的。優(yōu)化的方法包括錐箍的深度適當，同時盡可能減小管路的內徑和長度。圖9是一個LC/MS/MS系統(tǒng)優(yōu)化前后的差異，靈敏度和分離度都提高了一倍以上。

c.有關優(yōu)化LC/MS/MS系統(tǒng)的建議

a)使用2.1mm內徑色譜柱時，請使用微徑檢測器流動池(說明:為了減小譜帶擴展體積而縮短流動池的長度會導致檢測器靈敏度下降)。

b)盡可能減小進樣器的loop環(huán)體積。

c)常規(guī)HPLC系統(tǒng)使用0.009英寸(0.25mm)的連接管路，使用2.1mm微徑柱的系統(tǒng)需要使用0.005英寸(0.12mm)的管路。

d)注意不同廠家色譜柱的不同，保證管路和色譜柱連接恰當。

e)檢測器時間常數(shù)應縮短為0.2秒以內。

d.沃特世小顆粒填料(2.5μm)色譜柱-快速液相色譜

  沃特世公司2.5μm顆粒的色譜柱提供快速高效分離，并具有很好的柱壽命，以下內容列出了使用2.5μm小顆粒色譜柱需要考慮的幾個因素:

  注意:裝填2.5μm小顆粒的色譜柱出口端的過濾片孔徑比進口端小，因此不能將色譜柱進行反沖。

a)流速:同5μm顆粒的色譜柱相比，2.5μm顆粒的色譜柱具有更高的最佳流速，當需要高柱效和快速分離時需要選擇這種色譜柱。當然，高流速勢必會產生高的操作壓力。

提示:請根據(jù)所用LC系統(tǒng)的實際情況調節(jié)流速

b)反壓:對于同樣規(guī)格的色譜柱，2.5μm顆粒的柱壓比5μm顆粒要高很多。沃特世公司建議選擇較短的色譜柱，這樣還可以達到更快的分離。

c)溫度:可以使用較高的溫度來補償小顆粒造成的壓力升高，XTerra色譜柱的建議使用溫度是

20-60℃。

d)采樣速率:使用10點/秒以上的采樣速率，為了得到最佳的重現(xiàn)性，則需要最早流出的峰至少具有20個數(shù)據(jù)點。

e)檢測器時間常數(shù):對于快速分析,使用0.1秒以下的時間常數(shù)。