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Inertsil Amide色譜柱操作說明

更新時(shí)間:2024-09-26      點(diǎn)擊次數(shù):536

1.色譜柱信息

  Inertsil Amide液相色譜柱是在高純度硅膠基質(zhì)上鍵合烷基酰胺基的HILIC(Hydrophilic

Interaction Chromatography)模式色譜柱,適合用于強(qiáng)極性至中等極性例如一些極性藥物、小生物分子的分離。Inertsil Amide液相色譜柱從硅膠基質(zhì)的合成,到化學(xué)處理和裝填后的性能檢測(cè),都是在本公司嚴(yán)格的產(chǎn)品控制下進(jìn)行,因此不同批次的柱與柱之間具有優(yōu)異的重現(xiàn)性;通過獨(dú)有的裝填技術(shù)填裝的Amide柱柱床密度均一穩(wěn)定,從而確保色譜柱具有高柱效,在極性和親水性化合物如碳水化合物、代謝物、有機(jī)酸、有機(jī)堿、氨基酸、蛋白及多肽水解物等的分離過程中,可作為改變柱選擇性和提高分辨率的分離工具。

  為了能長(zhǎng)期保持Inertsil Amide液相色譜柱的優(yōu)越性能和正確的使用色譜柱,在使用色譜柱之前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明書。

 

2.使用前的檢查與須知事項(xiàng)

檢查包裝箱的外觀有無異常。

●打開包裝,檢查色譜柱的填料名稱、尺寸規(guī)格、連接形式是否相符。

●色譜柱中封存流動(dòng)相為乙腈/=95:5,v/v。

 

3.色譜柱填料規(guī)格

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4.色譜柱安裝與操作

  色譜柱在運(yùn)輸過程中,兩端用堵頭密封。當(dāng)將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時(shí),首先請(qǐng)確保系統(tǒng)中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的。如果不能互溶,請(qǐng)采用一種能夠與系統(tǒng)及色譜柱都能互溶的溶劑對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統(tǒng)中,并注意流動(dòng)相的方向要與柱上標(biāo)記的方向保持一致。我公司提供的常規(guī)液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)接頭型式為1/16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖),同時(shí)還有耐高壓液相系統(tǒng)的UP(如下右圖)(目前Amide系列暫不提供UPLC)。如果需要其他接頭形式請(qǐng)另行咨詢。

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色譜柱連接好之后,請(qǐng)確認(rèn)無漏液現(xiàn)象之后再進(jìn)行后續(xù)操作。

新的Amide柱是保存在乙腈/(95:5,v/v)的溶液中,在儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中,硅膠填料可能會(huì)干涸,推薦用純的乙腈沖洗10~20倍柱體積對(duì)色譜柱進(jìn)行活化,流速?gòu)?/span>0.1mL/min緩慢上升到最佳流速。(如果在活化過程中即發(fā)現(xiàn)壓力和基線不正常時(shí),請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我公司工程師處理。)然后再用不含緩沖鹽的流動(dòng)相進(jìn)行平衡20倍柱體積,再用流動(dòng)相平衡,待壓力和基線穩(wěn)定之后,再進(jìn)樣分析。

 

5.樣品與流動(dòng)相

  為避免色譜柱堵塞,所有樣品及溶劑,包括緩沖溶液在內(nèi),在使用前必須用0.45μm或者0.22 μm的濾膜過濾。樣品溶劑需要含60-100%的有機(jī)溶劑,水的比例應(yīng)盡量小,推薦5%的水作為自動(dòng)進(jìn)樣器的清洗液。適用于HILIC分離的緩沖鹽體系為甲酸鹽和乙酸鹽,因?yàn)榧词乖俸芨弑壤挠袡C(jī)溶劑中它們也有很好的溶解性。避免使用磷酸鹽及其他低溶解性緩沖鹽,以防析出堵塞色譜柱。對(duì)于大多數(shù)分析樣品,推薦的緩沖鹽濃度為5-20mM。避免使用其他非揮發(fā)性緩沖鹽、TFA或者離子對(duì)試劑,它們會(huì)干擾HILIC分離機(jī)理,并抑制MS信號(hào)。通常的HILIC應(yīng)用中,一般使用50-95%濃度乙腈的水溶性緩沖鹽,如甲酸鹽、乙酸鹽或者它

們的酸作為流動(dòng)相。流動(dòng)相使用前請(qǐng)務(wù)必進(jìn)行脫氣。

 

6.色譜柱的保養(yǎng)

pH Amide色譜柱可在pH2~7.5范圍內(nèi)使用,為保持色譜柱良好的壽命,請(qǐng)避免較強(qiáng)的酸或堿性樣品或者流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱。

●耐壓 Amide常規(guī)色譜柱耐受壓力為20MPa,HP系列耐壓為50MPa,但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下。長(zhǎng)時(shí)間在高壓下運(yùn)行會(huì)對(duì)色譜柱造成難以修復(fù)的損害,因此系統(tǒng)壓力升高之后,建議盡快排查系統(tǒng),如果是色譜柱壓力升高,請(qǐng)及時(shí)采用適當(dāng)溶劑沖洗色譜柱。

●溫度最高操作溫度為60℃,長(zhǎng)時(shí)間在高溫下操作會(huì)顯著降低色譜柱壽命。

●沖洗

1. 新柱平衡:新柱是保存在高比例的有機(jī)溶劑中,建議先采用色譜柱保存流動(dòng)相平衡色譜柱一段時(shí)間,觀察基線和壓力是否正常,然后再通入流動(dòng)相。如果流動(dòng)相中不使用緩沖鹽或離子對(duì)試劑,直接用流動(dòng)相平衡即可;如果流動(dòng)相使用緩沖鹽,先要用高比例的水相充分過渡20倍柱體積,然后進(jìn)行流動(dòng)相平衡。

2.使用完畢后的清洗、保存及再使用時(shí)流動(dòng)相的過渡:

①使用完畢后,先用高比例的水相進(jìn)行沖洗約20倍柱體積。

②如果流動(dòng)相中不使用緩沖鹽或離子對(duì)試劑,上述①完畢后,用100%的有機(jī)溶劑沖洗約20倍柱體積,然后此條件下進(jìn)行保存,再使用時(shí)直接沖流動(dòng)相即可。

③如果流動(dòng)相中使用緩沖鹽或離子對(duì)試劑,上述①完畢后,用100%的有機(jī)溶劑沖洗約20倍柱體積,然后此條件下進(jìn)行保存,再使用時(shí)請(qǐng)務(wù)必用高比例的水相充分過渡20倍柱體積,再通入流動(dòng)相。

●儲(chǔ)存色譜柱長(zhǎng)期不用,建議日常沖洗方法完成之后,再用純有機(jī)溶劑沖洗20倍柱體積,然后保存在此溶劑中,之后卸掉色譜柱,兩端用堵頭密封,并放在溫度變化小的場(chǎng)所。


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