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Symmetry色譜柱使用窄徑柱和小粒徑柱需要注意的問題及優(yōu)化建議

更新時間:2024-09-27      點擊次數(shù):581

a. 使用窄徑(內(nèi)徑<3.0 mm)色譜柱

  本節(jié)將介紹如何盡量減少柱外效應,并介紹在HPLC系統(tǒng)中盡可能提高窄徑色譜柱性能的原則。使用內(nèi)徑3.0 mm的窄徑色譜柱時通常無需更改系統(tǒng)配置。但使用內(nèi)徑2.1mm的色譜柱時,需要更改HPLC系統(tǒng)配置才能避免系統(tǒng)譜帶展寬體積過大。如果不恰當?shù)馗南到y(tǒng)配置,會因系統(tǒng)譜帶展寬體積過大而導致峰展寬,隨著峰體積減小,這會對峰寬造成嚴重影響。

 

b. 譜帶展寬體積對內(nèi)徑2.1 mm的色譜柱性能的影響

注:在色譜柱后使用分流器會加劇譜帶展寬。

  系統(tǒng)優(yōu)化可能對靈敏度和分離度產(chǎn)生巨大影響,對于配置了分流器的系統(tǒng)尤其如此。優(yōu)化措施包括使用深度正確的錐箍以及盡可能減小管路內(nèi)徑和長度。圖9給出了一個示例,通過

優(yōu)化LC-MS/MS系統(tǒng),測定代謝物的靈敏度和分離度提高了一倍。

image.png

 

c. 未優(yōu)化和優(yōu)化LC-MS/MS系統(tǒng)對比:系統(tǒng)配置更改建議

1. 將微內(nèi)徑檢測器流通池與內(nèi)徑- 2.1 mm 色譜柱配合使用

注:為減小譜帶展寬體積而縮短流通池光程時,檢測器靈敏度也會隨之降低。

2. 盡可能減小樣品定量環(huán)體積。

3. 在泵和進樣器之間使用0.009英寸(0.25 mm)的管路。

4. 對于標準系統(tǒng),其余連接也請使用0.009英寸(0.25 mm)的管路,對于窄徑(內(nèi)徑2.1 mm)系統(tǒng),其余連接請使用0.005英寸(0.12 mm)的管路。

5. 使用完全接合的(預切割)連接(如果使用不同供應商的色譜柱,請使用深度可調(diào)的入口)。

6. 檢測器的時間常數(shù)應縮小至0.2 s以下。

 

d. 沃特世小粒徑(3.5 -m)色譜柱-快速色譜分離

  填充3.5μm顆粒的沃特世色譜柱可實現(xiàn)更快速、更高效 的分離,而不會縮短色譜柱使用壽命。本節(jié)將介紹使用填充3.5μm顆粒的色譜柱進行分離時要考慮的5個參數(shù)。

注:為保留填料,填充3.5μ-m顆粒的色譜柱出口篩板較小。請勿反沖此類色譜柱。

1. 流速-3.5μm色譜柱的理想流速高于5μm色譜柱。使用此類色譜柱可以提高效率和縮短分析時間。但是,較高的流速會導致柱壓增加。請使用適合系統(tǒng)的流速。

2. 柱壓-3.5μm色譜柱的柱壓高于同尺寸的5μm色譜柱??s短色譜柱長度可抵消柱壓增量,并縮短分析時間。

3. 溫度-使用較高的溫度可降低因粒徑較小而產(chǎn)生的柱壓(請參閱色譜柱維護和使用手冊第III.f.節(jié)中建議的溫度)。

4. 采樣速率-請使用大約每秒10個數(shù)據(jù)點的采樣速率。

5. 檢測器時間常數(shù)-請使用0.1 s作為時間常數(shù),以實現(xiàn)快速分析。


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